RIPA lízispuffer (gyenge)

 

Termék neve	Macska. Nem.	Spec.
RIPA lízispuffer (gyenge)	G2033-30ML	30 ml
	G2033-100ML	100 ml

 

 

A RIPA Lysis Buffer egy hagyományos gyors lízisoldat sejtek és szövetek számára. Különféle kiszerelésben kapható, erős, közepes vagy gyenge kategóriába sorolva. A szövetek és sejtek líziséből nyert fehérjeminták RIPA gyenge lízis oldatokban felhasználhatók rutin PAGE, Western és egyéb kísérletekhez, ahol a fehérjeaktivitás nem feltétlenül szükséges. Ez a termék 50 mM Tris-HCl-t (pH 7,4), 150 mM NaCl-t, 1 mM EDTA-2Na-t, 0,25% nátrium-dezoxikolátot és 1% NP-40-ot tartalmaz. Alkalmas állati vagy növényi szövetek, sejtek, de használható gomba vagy baktérium minták készítésére is.

 

 

Hajó nedves jéggel; Tárolja 2-8 fokos fénytől távol; 12 hónapig érvényes.

 

 

 

Összetevő	G2033-30ML	G2033-100ML
RIPA lízispuffer (gyenge)	30 ml	100 ml
Kézikönyv		1 db

 

 

Saját termelésű proteázgátlókat igényel. Használat előtt proteáz inhibitorokat (G2006, G2007, G2008 stb.) kell hozzáadni a RIPA Lysis (Gyenge) termékhez, hogy megakadályozzák a fehérje lebomlását. A következő utasításokban a RIPA-lizátumra (Gyenge) tett hivatkozások proteázgátlókkal egészülnek ki.

• Szövetmintákhoz:

1. A szövetdarabokat előhűtött PBS-sel (G4202 ajánlott) mossuk, hogy eltávolítsuk a vérfoltokat, apró darabokra vágjuk, és a homogenizátorba helyezzük.

2. Adjon hozzá 10-szeres szövettérfogatú RIPA lízispuffert (gyenge) és homogenizálja alacsony hőmérsékleten (ajánlott a KZ-III-F és a KZ-III-FP nagysebességű szövetcsiszoló készülék használata, amelyet egymástól függetlenül fejlesztettek és gyártottak a Servicebio által). Vegye figyelembe, hogy a RIPA lízispuffer (gyenge) mennyisége körülbelül 50 mg szövet és 1 ml lizátum arányában adható hozzá. Ha a szöveti fehérjetartalom alacsony, a lizátum mennyisége csökkenthető a fehérjekoncentráció növelése érdekében a nyers kivonat oldatában.

3. Vigye át a homogenizátumot egy 1,5 ml-es centrifugacsőbe, és oszcillálja. Jégfürdő 30 percig, 10 percenként ismételt pipettázással, hogy biztosítsa a szöveti sejtek teljes lízisét.

4. Centrifugálja 12000 xg-vel 5 percig, és gyűjtse össze a felülúszót teljes fehérjeoldatként.

• Tapadó sejtminták esetén:

1. Mossa át a sejteket PBS-sel 2-3 alkalommal, és az utolsó alkalommal alaposan szívja fel a maradék folyadékot.

2. Szívjon RIPA lízispuffert (gyenge) a sejttenyésztő lemezbe és lombikba 250 μl sejtlizátum arányban a 6-lyuk lemez üregei között, rázza meg többször a tenyésztőlemezt és a lombikot, hogy a lizátum teljesen érintkezzen cellák 3-5 percig.

3. Kaparja le a sejteket egy cellakaparóval, és gyűjtse egy centrifugacsőbe.

4. Lizis jégen 30 percig.

5. Centrifugálja 12000 xg-vel 5 percig, és gyűjtse össze a felülúszót teljes fehérjeoldatként.

• Szuszpenziós sejtminták esetén:

1. Centrifugálja a sejteket.

2. Keverje össze a citoszolt RIPA lízispufferrel (gyenge) 250 μL lizátum/sejtüreg arányban egy 6-lyuk lemezen, és rázza fel.

3. Jégfürdő 30 percig, 10 percenként ismételt pipettázás a teljes sejtlízis biztosítására.

4. Centrifugálja 12000 xg-vel 5 percig, és gyűjtse össze a felülúszót teljes fehérjeoldatként.

• Bakteriális vagy gombás minták esetén:

1. Vegyünk 1 ml szuszpenziót, centrifugáljuk a felülúszó eltávolításához, és mossuk egyszer PBS-sel, hogy teljesen eltávolítsuk a folyadékot. Vortexelje, hogy a baktériumot a lehető legjobban eloszlassa.

2. Adjon hozzá 100-200 μL RIPA lízispuffert (gyenge), és óvatosan keverje össze, hogy jól elkeveredjen a lizátummal.

3. Jégfürdő 30 percig, 2 percenként ismételt pipettázás a teljes sejtlízis biztosítására.

4. Centrifugálja 12000 xg-vel 5 percig, és gyűjtse össze a felülúszót teljes fehérjeoldatként.

 

 

1. A szövetek vagy sejtek viszkózusnak tűnhetnek lizáláskor. Ezt úgy érhetjük el, hogy pipettával többször fújunk, vagy vortexerrel addig rázzuk, amíg folyékony nem lesz. Adjon hozzá további megfelelő mennyiségű lízisoldatot, ha sűrű marad.

2. Ez a reagens nem tartalmaz proteázgátlókat. Használat előtt adja hozzá saját proteázgátlóit. Cégünk G2006, G2007, G2008 és egyéb kapcsolódó proteáz inhibitorok használata ajánlott.

3. Biztonsága és egészsége érdekében viseljen védőszemüveget, kesztyűt vagy védőruházatot.

 

Csak kutatási célra!

 

 

Népszerű tags: ripa lysis puffer (gyenge), Kína ripa lysis puffer (gyenge) gyártók, beszállítók, gyár