Dual-Lumi Dual-Luciferase Reporter Gene Assay Kit

 

Termék neve	Macska. Nem.	Spec.
Dual-Lumi Dual-Luciferase Reporter Gene Assay Kit	G1701-100T	100T

 

 

A luciferáz rendszert leginkább riportergén kimutatására használják. A célgén transzkripciós szabályozó elemeit a luciferáz upstream és downstream részébe klónozzuk, hogy megalkossuk a riportergén plazmidot. A transzfektált sejteket ezután gyógyszerekkel vagy más ingerekkel kezelik, majd a sejteket összegyűjtik és lizálják, és a lizátumban mérik a luciferáz aktivitást. Az exogén ingerek, például gyógyszerek transzkripciós szabályozó hatását a célgénekre az határozza meg

luciferáz aktivitás. A kettős fluoreszcencia rendszerben kétféle fluoreszcenciát vezetnek be és detektálnak egymás zavarása nélkül, az egyiket detektáló fluoreszcenciaként, a másikat belső referencia fluoreszcenciaként használják a sejtszám és a transzfekció közötti különbségek kiküszöbölésére. hatékonyság.

Ez a Dual-Lumi Dual Luciferase (Firefly&Ranilla Luciferase) Reporter Gene Assay Kit a szentjánosbogár luciferáz aktivitásának kimutatására szolgál először szentjánosbogár-luciferin szubsztrátként, majd a ranilla luciferáz aktivitásának kimutatására coelenterazin szubsztrátként, miközben a szentjánosbogár fluoreszcenciáját kioltja. A készletet gyors észlelés, nagy érzékenység, széles érzékelési tartomány jellemzi, és a kétféle fluoreszcencia-detektálás nem zavarja egymást.

 

 

Szárazjéggel szállítani; Tárolja -80 fokon fénytől védve 12 hónapig; -20 fokos fénytől védve tárolandó, 6 hónapon belüli felhasználás javasolt.

 

 

Alkatrészszám	Összetevő	G1701-100T
G1701-1	Sejtlízis puffer	50 ml
G1701-2	Firefly luciferáz reakció szubsztrátum (50×)	200 μL
G1701-3	Firefly Luciferase Reaction Buffer	10 ml
G1701-4	Ranilla luciferáz reakció szubsztrát (50×)	200 μL
G1701-5	Ranilla luciferáz reakciópuffer	10 ml
Kézikönyv		1 db

 

 

1. Készítsen 1× Firefly Luciferase Reaction munkaoldatot:

1.1. A készletet szétválasztják és szobahőmérsékleten felolvasztják, és fejjel lefelé összekeverik, hogy biztosítsák az összetevők teljes feloldódását. A Firefly Luciferase Reaction Subsztrátot (50×) és a Ranilla Luciferase Reaction Substrate-t (50×) jégen kell felolvasztani, és rövid ideig centrifugálni kell, hogy a reagensek lesüllyedjenek a cső aljára;

1.2. Hígítsa fel a szentjánosbogár-luciferáz reakciószubsztrátot (50×) 50-szeresére szentjánosbogár-luciferáz reakciópufferrel, azaz 10 μL szentjánosbogár-luciferáz reakciószubsztrátot (50×) és 490 μL szentjánosbogár-luciferáz reakciópuffert jól összekeverünk, hogy 500 µl 1×-es szentjánosbogár-reakciós puffert kapjunk. luciferáz reakció munkaoldat tartalék használatra;

1.3. A Ranilla luciferáz reakciószubsztrátot (50×) 50--szeresére hígítjuk Ranilla luciferáz reakciópufferrel, azaz 10 μL Ranilla luciferáz reakciószubsztrátot (50×) összekeverünk 490 µl Ranilla Luciferase Reaction Pufferrel, hogy 500 µl legyen. 1× tengeri vese luciferáz reakció munkaoldat. A Ranilla Luciferase Reaction Puffer jól összekeverve 500 μL 1× Ranilla luciferáz reakciószubsztrátot kapunk (50×);

Megjegyzés: A pazarlás elkerülése érdekében az adagolás szerint készítse elő. Javasoljuk, hogy a luciferáz reakció munkaoldatát most használja fel, és tárolja -20 fokon, hogy egy hónapon belül felhasználhassa az ismételt fagyasztás és felengedés elkerülése érdekében.

2. Sejt-előkezelés és -lízis:

2.1. A sejteket a megfelelő lemezekre ültetjük be, és a kísérleti igényeknek megfelelően transzfektáljuk, vagy más kapcsolódó előkezelést végzünk;

2.2. Tapadó sejtek esetében: az eredeti sejttenyésztő táptalaj eltávolítása után adjon hozzá megfelelő mennyiségű sejtlízis puffert az alábbi táblázat szerint, hogy ellepje a sejteket; Szuszpendált sejtek esetén vigye át a sejteket egy centrifugacsőbe, centrifugálja a táptalaj eltávolításához, majd adjon hozzá a megfelelő mennyiségű sejtlízis puffer a sejtek újraszuszpendálásához az alábbi táblázat szerint;

 

Sejttenyésztő lemez	Sejtlízis puffer/lyuk
6-jól	500 μL
12-jól	300 μL
24-jól	200 μL
48-jól	150 μL
96-jól	100 μL

 

2.3. Szobahőmérsékleten 10-20 percig tartó elegendő lízis után a sejteket lekaparjuk és egy 1,5 ml-es centrifugacsőbe gyűjtjük, 4 fokon, 12000 g-vel centrifugáljuk 10 percig, és a felülúszót (sejtlizátumot) tartalék felhasználásra megtartjuk;

3. Fluoreszcencia kimutatás:

3.1. Az előre elkészített 1x szentjánosbogár-luciferáz reakció munkaoldatot és 1x Ranilla luciferáz reakció munkaoldatot szobahőmérsékletre egyensúlyba hozzuk;

3.2. 1 × Firefly Luciferase Reaction Work Solution 100 μl/lyuk mennyiségben hozzáadunk egy átlátszatlan fehér 96-lyukú lemezhez;

3.3. A 2. lépésből származó sejtlízis felülúszót hozzáadjuk a fenti 96-lyuklemezhez 20 μl/lyuk mennyiségben;

3.4. A vízszintes oszcilláció egyenletes, a lehető leghamarabb használjon Luminométert, többfunkciós enzimmarkert kemilumineszcenciás érzékelő modullal vagy egyéb olyan műszert, amely képes kimutatni a biolumineszcenciát, kemilumineszcenciás detektálást -- szentjánosbogár luciferáz riportergén aktivitásának kimutatását (fluoreszcencia intenzitás);

3.5. 1 × Ranilla Luciferase Reaction Work Solution 100 μl/lyuk mennyiségben adunk azokhoz a mérőhelyekhez, ahol a szentjánosbogár-luciferáz riportergén aktivitást a fent leírtak szerint kimutatták;

3.6. A vízszintes oszcilláció egységes, a lehető leghamarabb használjon Luminométert, többfunkciós enzimmarkert kemilumineszcenciás detektáló modullal vagy egyéb olyan műszert, amely képes kimutatni a biolumineszcenciát, kemilumineszcenciás detektálást -- Ranilla luciferáz riportergén aktivitás kimutatását (fluoreszcencia intenzitás).

 

 

1. Az észlelés előtt az 1× Firefly Luciferase Reaction munkaoldatot használat előtt szobahőmérsékletre kell visszaállítani.

2. A luciferáz reakciópuffer felengedés után némi csapadékot tartalmaz, ami normális jelenség, és használat előtt alaposan fel kell rázni, hogy teljesen feloldódjon.

3. Az 1×Luciferáz reakció munkaoldat érzékeny az oxidációra, többmintás detektálásnál az 1× Luciferase Reaction munkaoldat adagolását lehetőleg rövid időn belül ellenőrizni kell. Többcsatornás pipetta használata javasolt mintaadagoláshoz, és ügyeljen arra, hogy a pipetta egyes üregeinek szívótérfogata konzisztens-e.

4. A lyukak közötti interferencia elkerülése érdekében ajánlott átlátszatlan fehér lyuklemezek használata.

5. Egészsége és biztonsága érdekében, kérjük, viseljen laborköpenyt és kesztyűt működés közben.

 

Csak kutatási célra!

 

 

Népszerű tags: dual-lumi dual-luciferase riporter gén vizsgálati készlet, Kína dual-lumi dual-luciferase riporter gén vizsgálati készlet gyártók, beszállítók, gyár