SweAgrose Protein G Antitest Tisztított agaróz

 

Termék neve	Macska. Nem.	Spec.
SweAgrose Protein G Antibody Tisztított agaróz	G2207-1ML	1 ml
	G2207-5ML	5 ml

 

 

Az A protein a Staphylococcus aureusban található sejtfalfelszíni fehérje, amelynek molekulatömege 42 kDa. A Protein G egy immunglobulinkötő fehérje, amelyet a Streptococcus baktériumok (C vagy G) expresszálnak. A Protein A és a Protein G funkcionálisan hasonló, és specifikusan kötődhet emlős immunglobulinhoz (Ig). Az agarózhoz kötött, megfelelő módosításokkal rendelkező rekombináns protein A és G felhasználható immunprecipitációra vagy antitest-tisztításra. A Protein A agaróz alkalmas a humán IgG1, IgG2, IgG4, egér IgG2a, IgG2b megkötésére, míg a Protein G agaróz a humán IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, egér IgG1, IgG2a, IgG2b, patkány IgG3, IgG3 IgG2b, IgG2c és más poliklonális antitestek. (A konkrét információkért lásd az I. táblázatot)

Ez a termék a saját fejlesztésű és előállított Protein G jelű agarózt alkalmazza, a piacon lévő hasonló termékekhez képest ez a termék hatékonyabban köti meg az antitesteket és alacsonyabb a nem specifikus kötődési sebessége, az optimalizált pufferrel együtt kényelmes és hatékony lehet immunprecipitációs kísérletekhez; széles körben alkalmazható a célfehérjék izolálására és tisztítására olyan mintákban, mint például sejtlizátumok, sejtszekréciós felülúszók, szérum, ascites stb.

 

 

Jellemzők	Leírás
A termék tartalma	50% (v/v) agaróz specifikus védőpufferben
Gyöngyök szerkezete	6% térhálósított agaróz
Kapcsolt fehérje	Protein G
MWof fehérje	~25 kDa (protein G)
Kötési képesség	>1 mg egér antitest/ml gyöngy
Specificitás	Különböző fajokból származó antitestek, köztük egerek, emberek, patkányok, kecskék, juhok és szarvasmarhák
Gyöngyök mérete	30~150 μm
Elúciós módszer	Elúció savval vagy 1x SDS-PAGE betöltő pufferrel (csökkentett) Megjegyzés: Ha 1x SDS-PAGE töltőpufferrel (csökkentett) eluáljuk, az antitest nehéz lánca (~ 50 kDa) és könnyű lánca (~ 25 kDa) denaturálódik és felszabadul az agaróz gyöngyökről.
Alkalmazás	IP, Co-IP, Fehérje tisztítás

 

 

Hajó nedves jéggel; Tárolás 2-8 fokon, 12 hónapig érvényes.

 

 

Alkatrészszám	Összetevő	G2207-1ML	G2207-5ML
G2207	SweAgrose Protein G Antibody Tisztított agaróz	1 ml	5 ml
Kézikönyv		1 db

 

 

Az antitest-tisztítással kapcsolatos reagenskészítmények a következőkre vonatkoznak, a felhasználó a konkrét kísérleti körülményeknek megfelelően beállítható.

Összetevő	Reagens kombináció
Binding Wash Buffer	PBST: 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2.0 mM KH2PO4, 0,1% Tween-20
Elúciós puffer	100 mM Gly, 0,1% Tween-20, pH 2,5
Semlegesítő puffer	1.{1}} M Tris-HCl, pH 9.0
Megőrző puffer	PBST, 0,1% (v/v) Proclin 300

 

Kézi eljárás (példaként az egér ascites IgG tisztítása)

1. Mintafeldolgozás: vegyünk 500 μl ascites mintát, adjuk hozzá a kötőmosó puffert, hogy 500 µl legyen, ha több fehérjecsapadék van a mintában, centrifugáljuk a felülúszót kísérletekhez, ami javíthatja az antitest tisztaságát.

2. Agaróz előkezelés: Vortexelje az antitestből tisztított agarózt 30 másodpercig, hogy megfelelően szuszpendálódjon, vegyen 100 μL 50%-os (v/v) SweAgarose Protein G antitest Tisztított agarózt egy másik új 1,5 ml-es EP csőbe, centrifugálja 6 °C-on,{{7} } xg 30 másodpercig 4 fokon, és dobja ki a felülúszót, kétszer mossuk 1 ml kötőmosó pufferrel, majd mágneses leszívás után vegyük ki a felülúszót.

Megjegyzés: Az agaróz mennyisége beállítható a mintában lévő antitest mennyiségének megfelelően.

3. Antitest adszorpciója: az 1. lépésben feldolgozott mintát a 2. lépésben agarózhoz adjuk, vortexeljük és jól keverjük össze, helyezzük az EP csövet egy forgó keverőbe, vagy kézzel óvatosan forgassuk el a csövet szobahőmérsékleten (kb. 25 fokon) az agaróz elkészítéséhez. teljesen érintkezzen a mintával, fordítsa meg 15 percig, centrifugálja 6, 000 xg 30 másodpercig 4 fokon, majd dobja ki a felülúszót.

4. Agarózos mosás: adjon 1 ml kötőmosó puffert az EP-csőhöz, rázással szuszpendálja újra, majd centrifugálja 6, 000 xg-vel 30 másodpercig 4 fokon. Dobja ki a felülúszót, és ismételje meg a műveletet háromszor.

5. Antitest-elúció: Adjon 0,5~1.0 ml eluenst az EP-csövekhez a fent leírtak szerint mosott agarózzal, majd pipettázással vagy vortexezéssel gyorsan szuszpendálja újra a csöveket, majd óvatosan forgassa el. a csöveket forgókeverőben vagy kézzel szobahőmérsékleten (körülbelül 25 fokon) centrifugálja 6,000 xg-vel 30 másodpercig 10 perces megfordítás után 4 fokon, majd a felülúszót új EP-csövekbe gyűjtsük.

6. Ellenanyag semlegesítés: adjon hozzá bizonyos mennyiségű semlegesítő oldatot az antitest eluátumhoz az 5. lépésben, általában az antitest eluátum térfogatának 1/10-ét (pl. ha az antitest eluátum 500 μL, a hozzáadott semlegesítő oldat mennyisége 50 μL) , hogy az eluált antitest pH-értéke olyan semleges környezetben maradjon fenn, amely elősegíti az antitest biológiai aktivitásának fenntartását és az elkerülhető antitestet. inaktiválás.

7. Az agaróz utókezelése: Használat után az agarózt kétszer mossuk elúciós oldattal, centrifugáljuk 6, 000 xg-vel 30 másodpercig 4 fokon, majd dobjuk ki a felülúszót; majd háromszor mossuk meg kötőmosó oldattal, centrifugáljuk 6, 000 xg-vel 30 másodpercig 4 fokon, és dobjuk ki a felülúszót; szuszpendálja újra az agarózt 200 µL tartósító oldattal, majd tárolja 2-8 fokon.

 

 

1. Kérjük, figyelmesen olvassa el ezeket az utasításokat, mielőtt folytatná az antitestek tisztítását.

2. Ne fagyassza le vagy centrifugálja az agarózt, mert ez az agaróz visszafordíthatatlan aggregációját okozhatja.

 

1. táblázat

Faj	Ig	Protein A	Protein G	Összesen Ig	Protein A	Protein G
Emberi	IgG1	++++	++++	Emberi	++++	++++
	IgG2	++++	++++	Egér	+++	+++
	IgG3	-	++++	Patkány	+/-	++
	IgG4	++++	++++	Nyúl	++++	+++
	IgA	++	-	Kecske	-	++
	IgD	++	-	Csirke	-	+
	IgE	++	-	Tehén	++	++++
	IgM	++	-	Tengeri malac	++++	++
Egér	IgG1	+	++++	Hörcsög	+	++
	IgG2a	++++	++++	Ló	++	++++
	IgG2b	+++	+++	Sertés	+++	+++
	IgG3	++	+++	Juh	+/-	++
	IgM	+/-	-	++++: Erős Bing
Patkány	IgG1	-	+	++~+++: Közepes kötés
	IgG2a	-	++++	+: Gyenge kötés
	IgG2b	-	++	+/-: Gyenge vagy nincs kötés
	IgG2c	+	++	-: Nincs kötés
	IgM	+/-	-

 

Csak kutatási célra. Diagnosztikai vagy terápiás eljárásokhoz nem használható!

 

 

Népszerű tags: sweagrose protein g antitest tisztított agaróz, Kína sweagrose protein g antitest tisztított agaróz gyártók, beszállítók, gyár