Rekombináns SUMO proteáz (Ulp1, His-tag)

 

Termék neve	Macska. Nem.	Spec.
Rekombináns SUMO proteáz (Ulp1, His-tag)	G3411-2000U	2000 U

 

 

A rekombináns SUMO proteáz egy rendkívül aktív ciszteinil-proteáz, más néven Ulp1 (ubiquitin-like protein-specific protease 1). SUMO A proteáz nagyon specifikus módon hasít, felismerve az ubiquitin-szerű (UBL) fehérje, a SUMO harmadlagos szerkezetét, nem pedig a SUMO-t. aminosav szekvencia. A hasítás optimális hőmérséklete 30 fok; azonban az enzim széles hőmérséklet-tartományban (2-30 fok) és pH-tartományban (pH 6.{{10}-10.0) aktív. A tényleges működés során a célfehérje szerkezetének és biológiai aktivitásának megőrzése érdekében a Rekombináns SUMO Proteáz alkalmazása javasolt 4 fokon egy éjszakán át. Ugyanakkor a megfelelő koncentrációjú DTT (05-2 mM) hozzáadása az emésztőrendszerbe az emésztés hatékonyságát is jelentősen javíthatja. A SUMO proteáz, egy rendkívül aktív ciszteinil-proteáz, más néven Ulp, az emésztőrendszer rekombináns fragmentuma. Ulp1 (Ubl-specifikus proteáz 1) a Saccharomyces cerevisiae-ből. A SUMO proteáz nagyon specifikus módon hasít, felismerve az ubiquitin-szerű (UBL) fehérje, a SUMO harmadlagos szerkezetét, nem pedig egy aminosavszekvenciát. A proteáz felhasználható a SUMO lehasítására rekombináns fúziós fehérjékről. A hasítás optimális hőmérséklete 30 fok; az enzim azonban széles hőmérséklet-tartományban (2-30 fok) és pH-tartományban (pH 6,0-10,0) aktív. Az emésztés után a SUMO Protease könnyen eltávolítható a hasítási reakcióból affinitáskromatográfiával, a proteáz N-terminálisán lévő polihisztidin jelöléssel.

 

 

A proteáz felhasználható a SUMO rekombináns fúziós fehérjékről történő lehasítására.

Forrás: Saccharomyces cerevisiae cisztein proteáz, E. coli-ból tisztítják affinitáskromatográfiával, polihisztidin jelöléssel.

Enzimaktivitás: Egy egység SUMO Protease hasítja a 2µg kontroll szubsztrát legalább 85%-át 1 óra alatt 30 fokon és 8,0 pH-n.

Inaktiválás vagy gátlás: Az imidazol 150 mM-nál nagyobb koncentrációja hátrányosan befolyásolhatja a proteáz aktivitását.

Tisztaság és koncentráció: Tisztaság Nagyobb vagy egyenlő, mint 95% SDS-PAGE szerint, 10 U/μL.

Rekombináns SUMO proteáz tároló oldat: 25 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0,1% NP-40, 250 mM NaCl, 500 μM DTT, 50% (v/v) ) glicerin.

10×SUMO puffer+só: 500 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2% NP-40, 1,5 M NaCl, 10 mM DTT.

10×SUMO puffer – só: 500 mM Tris-HCl, pH 8,0,2% NP-40, 10 mM DTT.

 

 

Hajó nedves jéggel; Tárolás -20 fokon; 12 hónapig érvényes.

 

 

Alkatrész száma	Összetevő	G3411-2000U
G3411-1	Rekombináns SUMO proteáz (His-tag) (10 U/μl)	200 μL
G3411-2	10×SUMO puffer + só	1 ml
G3411-3	10×SUMO puffer - só	1 ml
G3411-4	Kontroll fehérje	100 μL
Kézikönyv

 

 

1. Proteáz emésztőrendszer javasolt:

Összetevő	Kötet
10×SUMO puffer +/- só	5 μL
Célfehérjék	20 ug
Rekombináns SUMO proteáz (His-tag) (10 U/μl)	1 μL
ddH2O	50 μl-re

 

Megjegyzés: A legtöbb fúziós fehérje esetében a SUMO Protease optimálisan működik 150 mM NaCl-t tartalmazó reakcióelegyben; azonban a körülmények optimalizálhatók a NaCl koncentráció 0 mM és 300 mM közötti változtatásával.

2. Helyezze 30 fokra 1, 2 vagy 4 órára. 4 fokon egy éjszakán át (kb. 16 óráig) is emészthető, ha a célfehérje 30 fokon nem stabil;

3. Távolítson el 10 μL enzimes emésztési terméket az SDS-PAGE elektroforézishez, hogy értékelje az enzimemésztés mennyiségét és a reakciókörülményeket.

 

 

1. Használatkor tegye jégdobozba vagy jégfürdőbe, és külön tárolja -20 fokon közvetlenül a használat után.

2. Biztonsága és egészsége érdekében viseljen védőszemüveget, kesztyűt vagy védőruházatot.

Példák enzimemésztési alkalmazásokra

1. ábra: A kontroll szubsztrát fehérje (SUMO+B fúziós fehérje) rekombináns SUMO proteáz emésztésének hatása (Az enzimes emésztés körülményei 30 fok és pH 8.0, 0 perc, 10 perc , 20 perc, 30 perc, 1 óra, 2 óra és 4 óra, ami viszont megfelel a 1-7 sávnak, valamint az enzimhez hozzáadott szubsztrát és enzim tömegarányának emésztőrendszer 10:1)

 

Csak kutatási célra!

 

 

Népszerű tags: rekombináns szumóproteáz (ulp1, his-tag), kínai rekombináns szumóproteáz (ulp1, his-tag) gyártók, beszállítók, gyár