Széklet DNS készlet

Ez a készlet az üvegszál membránok reverzibilis nukleinsavadszorpciós tulajdonságait használja fel, és gyorsan és megbízhatóan képes kiváló minőségű, sértetlen genomi DNS-t izolálni 100-200 mg friss vagy fagyasztott székletmintákból. Egyedülálló lízispuffer rendszerrel kombinálva hatékonyan eltávolítja a székletmintákból a huminsavat, poliszacharidot, fenolvegyületeket és enzimgátlókat. A tisztított DNS alkalmas olyan downstream molekuláris biológiai technikákhoz, mint a PCR, enzimes emésztés és hibridizáció.

A proteináz K-t és az RNáz A-t nedves jégcsomagokban szállították és -20 fokon tárolták; A többi reagenst szobahőmérsékleten szállítják, szobahőmérsékleten tárolják, 12 hónapig érvényesek.

1. Kérjük, előzetesen készítsen elő egy 70 fokos vízfürdőt vagy fűtőblokkot.

2. Ha a reagens kicsapódik, oldja fel 37 fokon, és szobahőmérsékletre való visszahűtés után használja fel.

3. Használat előtt adjon hozzá 30 ml izopropil-alkoholt az SGB pufferhez, adjon hozzá 18 ml vízmentes etanolt az SGD pufferhez, és adjon hozzá 49 ml vízmentes etanolt a PW pufferhez.

1. Mérjünk be 100-200 mg székletmintát egy 2 ml-es centrifugacsőbe, és helyezzük jégre (ha a minta folyékony, pipettázzon 200 µL-t a centrifugacsőbe);

2. Adjon hozzá 600 μL puffer SLA-t, 15 μL proteináz K-t és 0,25 g őrlőgyöngyöt (1 mm) a centrifugális csőbe. Javasoljuk a szövetőrlő (KZ-III-F) használatát a daráláshoz (60 Hz, 4 fok, futtasson 30 másodpercig, szüneteltessen 10 másodpercet, őrölje meg 5-ször), amíg homogenizálódik, vagy használjon vortex eszközt a szakaszos rázáshoz 1 percig;

3. Inkubáljuk 70 fokon 15 percig. Vortexelje a mintát 2-3-szer az inkubáció során (ha a DNS-t Gram-pozitív baktériumokból izolálják, az inkubációs hőmérséklet 95 fokra növelhető);

4. Centrifugálja szobahőmérsékleten 12, 000 fordulat/perc (~13 400 × g) sebességgel 10 percig, majd pipettázza a felülúszót egy új, 1,5 ml-es centrifugacsőbe, ügyelve arra, hogy a csapadékot ne szívja fel;

5. Adjon hozzá 10 μL RNáz A-t az előző lépésben kapott felülúszóhoz, keverje alaposan a mintát voretxeléssel, inkubálja szobahőmérsékleten 5 percig, majd adjon hozzá SLB puffer felülúszó térfogatának 0,3-szorosát a centrifugacsőbe. , keverje alaposan a mintát voretxeléssel és jeges fürdővel 5 percig;

6. Centrifugálja szobahőmérsékleten 12, 000 fordulat/perc sebességgel (~13 400 × g) 5 percig, majd pipettázza a felülúszót egy új, 1,5 ml-es centrifugacsőbe, ügyelve arra, hogy a csapadék ne szívjon fel;

7. Adjon azonos térfogatú SGB puffert a centrifugacsőbe (használat előtt győződjön meg arról, hogy izopropil-alkoholt adtunk hozzá), majd pipettával fújja ki és keverje össze jól (csapadék képződhet);

8. Vigye át az előző lépésből származó összes keveréket a DNS Spin Columnba (az egyes adagok mennyisége nem haladhatja meg a 600 µL-t, ha több mint 600 µL adagolható adagonként), centrifugálja szobahőmérsékleten 12 °C-on, {{4} } ford./perc (~13 400×g) 1 percig. Dobja ki a szűrletet, és helyezze a DNS Spin Columnt a gyűjtőcsőbe;

9. Adjon hozzá 500 μL SGD puffert (felhasználás előtt győződjön meg arról, hogy vízmentes etanolt adtunk hozzá) a DNS Spin Column-hoz, centrifugálja szobahőmérsékleten 12, 000 fordulat/perc (~13 400 × g) sebességgel 1 percig. Dobja ki a szűrletet, és helyezze be a DNS Spin Columnt a gyűjtőcsőbe;

10. Adjon hozzá 600 μL puffer PW-t a DNS spinoszlophoz (használat előtt győződjön meg arról, hogy vízmentes etanolt adtunk hozzá, adjon hozzá puffer PW-t a cső fala mentén, hogy segítse a maradék só eltávolítását a falról), és centrifugálja szobahőmérsékleten 12 °C-on. ,000 ford./perc (~13 400×g) 1 percig. Dobja ki a szűrletet, és helyezze a DNS Spin Columnt a gyűjtőcsőbe;

11. Ismételje meg a 10. lépést;

12. Helyezze újra a DNS spin oszlopot a gyűjtőcsőbe, centrifugálja szobahőmérsékleten 12, 000 fordulat/perc (~13 400 × g) sebességgel 2 percig, vegye ki a DNS spin oszlopot és helyezze egy új, 1,5 ml-es centrifugába. cső;

13. Nyissa ki a DNS Spin Column fedelét, és helyezze szobahőmérsékleten 3-5 percre, hogy a maradék etanol teljesen elpárologjon;

14. Adjon hozzá 50-100 μL TE puffert vagy nukleázmentes vizet a membrán közepéhez, és helyezze szobahőmérsékleten 2 percre. Centrifugálja szobahőmérsékleten 12, 000 fordulat/perc sebességgel 2 percig, és gyűjtse össze a DNS-oldatot. Ha nagyobb koncentrációjú DNS-re van szüksége, a kapott oldatot újra hozzáadhatja a DNS Spin Columnhoz, szobahőmérsékleten 2 percre helyezheti, majd szobahőmérsékleten 12, 000 fordulatszámmal 2 percig centrifugálhatja, a DNS ismét eluálva. .

1. Használat előtt figyelmesen olvassa el ezt a termék kézikönyvét.

2. Viseljen laborköpenyt és eldobható kesztyűt működés közben.

3. Ha a székletminta száraz, növelje a puffer SLA mennyiségét 1 ml-re, vagy csökkentse a minta tömegét, fejjel lefelé néhányszor, és álljon szobahőmérsékleten 3-5 percig a puffer SLA hozzáadása után, ellenkező esetben hatással lesz a DNS-hozamra.

4. Ha 95 fokos inkubációra van szükség, nyissa ki egyszer a centrifugacső fedelét, amikor a hőmérséklet eléri a 95 fokot, engedje ki a gázt a centrifugacsőben, majd szorosan zárja le a centrifugacső fedelét, hogy megakadályozza a centrifugacsőben lévő gáz kitágulását és a fedél szétrepedését. székletminták fröccsenését eredményezi.

5. Egyes reagensek illékonyak vagy oxidálódnak, kerülni kell a levegőnek való hosszú expozíciót, a reagenst a használat után időben le kell zárni.

Csak kutatási célra!

Népszerű tags: széklet DNS készlet, Kína széklet DNS készlet gyártók, beszállítók, gyár