Termék bemutatása
|
Termék neve |
Macska. Nem. |
Spec. |
|
Alkáli foszfatáz (hőérzékeny) |
G3400-1000U |
1000 U |
Termék bemutatása
|
Termékleírás: |
A Servicebio® alkalikus foszfatáz (hőérzékeny) katalizálja az 5'- és 3'-foszfátcsoportok felszabadulását a DNS-ből, RNS-ből, dNTP-ből és rNTP-ből. Ez az enzim a foszfátcsoportokat is eltávolítja a fehérjékből. |
|
Alkalmazások: |
l A klónozó vektor DNS defoszforilációja a ligálás során történő recirkuláció megakadályozására. l PCR termék tisztítása: nukleotid lebontás a PCR termék szekvenálása előtt. l Nukleinsav 5'-terminális defoszforilációja a T4 polinukleotid kinázzal történő jelölés előtt. |
|
Forrás: |
Az E. coli klónozott bakteriális AP génnel az AntarcticBacteriumTAB5-öt alkotja. |
|
Tisztaság: |
95%-nál nagyobb vagy egyenlő az SDS-PAGE szerint |
|
Molekulatömeg |
~35 kDa |
|
Koncentráció: |
5 U/μL |
|
A tevékenységi egység meghatározása: |
Egy egység az az enzimmennyiség, amely 1 µg linearizált pUC19 DNS 5' végének defoszforilációjának katalizálásához szükséges 10 perc alatt 37 fokon. A defoszforiláció a linearizált plazmid DNS újraligálásának 95%-nál nagyobb gátlása (E. coli transzformációval meghatározva). |
|
10× ALP reakciópuffer: |
500 mM Bis-Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM ZnCl2, pH 6,0. |
|
Tároló (hígító) puffer: |
10 mM Tris-HCl, 1 mM MgCl2, 0,01 mM ZnCl2, 50% glicerin, pH 7,4. |
|
Inaktiválás vagy gátlás |
l Inhibitorok: fémkelátképzők. · l Inaktiválják 80 fokos melegítéssel 2 percig. |
|
Tárolási feltételek: |
-20 fokon 12 hónapig tárolható. |
Termék tartalma
|
Alkatrészszám |
Összetevő |
G3400-1000U |
|
G3400-1 |
Alkáli foszfatáz (hőérzékeny) |
200 μL |
|
G3400-2 |
10×ALP reakciópuffer |
1 ml |
|
Kézikönyv |
Egy példány |
|
Assay Protokoll / Eljárások
Ez a protokoll alkalmas a 3' és 5' -foszfát csoportok eltávolítására DNS-ből és RNS-ből.
- Olvassa fel a fagyasztott reagenseket, keverje össze és centrifugálja röviden.
- Tartsa az enzimeket jégen.
- Tartsa a 10×ALP reakciópuffert szobahőmérsékleten.
1. Készítse elő a következő reakcióelegyet, amely tartalmazza:
|
Összetevő |
Kötet |
|
DNS vagy RNS minta |
1-5 ug |
|
10×ALP reakciópuffer |
2 μL |
|
Alkáli foszfatáz (hőérzékeny) |
1 μL |
|
Nukleázmentes víz |
20 μl-re |
|
Teljes mennyiség |
20 μL |
2. Alaposan keverje össze, centrifugálja röviden, és inkubálja 37 fokon 15-30 percig. Az optimális inkubációs időt és az enzimkoncentrációt minden szubsztrátumhoz kísérletileg kell meghatározni.
3. Állítsa le a reakciót 2 perces 80 fokos melegítéssel.
4. A későbbi kísérletek igényei szerint a fenti defoszforilált DNS vagy RNS többféle módon tisztítható (például DNS-tisztító készlettel, fenolos kloroformos extrakcióval és etanolos precipitációs módszerrel).
Jegyzet
1. Az alkalikus foszfatáz, mint a legtöbb alkalikus foszfatáz, egy Zn2+- és Mg2+--függő enzim. Az ALP reakciópuffer elegendő Zn2+és Mg2+-t biztosít az enzimaktivitás garantálásához.
1. Az alkalikus foszfatázt fémkelátképzők (pl. EDTA), szervetlen foszfátok és foszfát analógok gátolják.
1. Az alkalikus foszfatáz aktivitása redukáló szerek (DTT, -ME) jelenlétében csökken.
2. Az alkalikus foszfatázt kezeléskor jégen kell szállítani, és használat után azonnal -20 fokon kell tárolni.
1. Biztonsága és egészsége érdekében viseljen védőszemüveget, kesztyűt vagy védőruházatot.
Csak kutatási célra!
Népszerű tags: alkalikus foszfatáz (hőérzékeny), kínai alkalikus foszfatáz (hőérzékeny) gyártók, beszállítók, gyár
