Mycoplasma Detection Kit (Lumineszcens)

Ezt a mikoplazma-detektáló készletet a mikoplazmában lévő specifikus enzim aktivitásának felhasználásával tervezték. Ez az enzim képes lebontani a specifikus szubsztrátot a mikoplazma-detektáló reagensben, és az ADP-t ATP-vé alakítja. A luciferáz katalizálja a luciferin oxidációját ATP jelenlétében, hogy biológiai fluoreszcenciát hozzon létre. Kemilumineszcenciás műszerrel meghatározható, hogy tükrözze, hogy a vizsgálandó minta szennyezett-e mikoplazmával. Az egész észlelési folyamat egyszerű, mindössze két lépést igényel, és körülbelül 15 percet vesz igénybe. Ez a módszer nagy érzékenységgel rendelkezik, és valódi biológiai aktivitással detektálja a Mycoplasmát, így a kimutatási eredmény pontosabb, mint a PCR.

Hajó nedves jéggel; -20 fokon tárolva, a Mycoplasma Detection A reagenst fénytől távol kell tartani, 12 hónapig érvényes.

1. Vegyünk megfelelő mennyiségű (1 ml elegendő) sejtfelülúszót 3-6 napig tenyésztve, centrifugáljuk 400 g-vel 3 percig, hogy eltávolítsuk a kis mennyiségű lebegő sejtet vagy törmeléket. Vegye ki a felülúszót és azonnal tesztelje, vagy tárolja 4 fokon egy hétig, vagy -80 fokon fél évig;

2. Minden vizsgálati reagenst és vizsgálati mintát állítson be szobahőmérsékleten, és a legalkalmasabb hőmérséklet 20-25 fok;

3. Adjon hozzá 50 μL vizsgálandó mintát, negatív kontrollt (pl. steril vizet vagy PBS-t) egy 96-lyukú lemezre (nem átlátszó lemez, speciális 96-üregű fehér lemez ajánlott). );

4. Adjon hozzá 50μL Mycoplasma Detection A reagenst, óvatosan keverje össze, ne képződjön buborék, és tartsa távol a fénytől szobahőmérsékleten (20-25 fok) 5 percig. Ezután a kemilumineszcenciás detektálást kemilumineszcenciás detektálású enzimmarkerrel végezzük, és a mérő leolvasása A. (Kérjük, állítsa be a megfelelő paramétereket a műszer érzékenységének megfelelően, és az egyes lyukak detektálási ideje általában 0.{101} {5}} s);

5. Adjon hozzá 50 μL mikoplazma-detektáló B reagenst, óvatosan keverje össze, ne képezzen buborékokat, és tartsa távol a fénytől szobahőmérsékleten (20-25 fok) 10 percig. Ezután a kemilumineszcenciás detektálást egy kemilumineszcenciás detektálású enzimmarkerrel végezzük, és a mérőműszer leolvasása B. (Megjegyzés: a Mycoplasma B tesztreagens hozzáadása után szigorúan 10 perccel végezze el a tesztet. Ezt nem szabad előre elvégezni. vagy késik, ellenkező esetben befolyásolja az eredmények megítélését);

6. Számítsa ki az=olvasott érték A/olvasott érték B arányt.

A. If B/A>1.1, azt jelzi, hogy a sejttenyészetben mikoplazma-szennyeződés van;

B. Ha B/A<0.9, there is no mycoplasma contamination in the cell culture;

7. Ha a B/A arány 0.9-1,1 közé esik, akkor javasolt a sejttenyésztést 24-48 órán keresztül folytatni, majd ismét tesztelni, hogy megállapítsa, van-e mikoplazma. szennyeződés. Ha a b/a arány még mindig 0.9-1.1 között van, a sejttenyészet nem fertőzött Mycoplasma-val, és Mycoplasma negatív.

1. A mikoplazma-detektáló A reagens luciferázt tartalmaz, amely az ismételt fagyasztás és felengedés hatására fokozatosan inaktiválódik. Javasoljuk, hogy az első kiolvasztás után megfelelően csomagolják és tárolják, és az alácsomagolt tartálynak tisztának és szennyeződésmentesnek kell lennie.

2. A teszteléshez erősen ajánlott fehér vagy fekete átlátszatlan 96-lyuklemezek használata, mivel a közönséges átlátszó 96-lyuklemezek interferenciát okozhatnak a szomszédos lyukakban.

3. Az emberi bőr felszíne ATP-ben gazdag. A tesztelés során viseljen kísérleti kesztyűt és maszkot. A többi fogyóeszköznek is tisztának és szennyeződésmentesnek kell lennie, hogy megakadályozzuk az ATP külső forrásokból származó szennyezését.

4. Biztonsága és egészsége érdekében viseljen kísérleti ruhát és eldobható kesztyűt.

Csak kutatási célra!

Népszerű tags: mikoplazma-detektáló készlet (lumineszcens), Kína mikoplazma-detektáló készlet (lumineszcens) gyártók, beszállítók, gyár