Kromatográfiás oszlop az exoszómák elválasztásához (sejtfelülúszó)

 

Termék neve	Macska. Nem.	Spec.
Kromatográfiás oszlop az exoszómák elválasztására (sejtfelülúszó)	G4113-5	5 darab

 

 

Az exoszómák nanoméretű membrános vezikulák, amelyek egyenletes méretűek és 30 - 150 nm-es részecskeméretűek, amelyeket a sejtek aktívan szekretálnak az extracelluláris térbe. Ezeknek a vezikuláknak saját specifikus markerei vannak, és fehérjékkel, mRNS-sel, miRNS-sel, lipidekkel és más anyagokkal vannak bevonva, amelyek a sejtek közötti anyag- és jelátviteli útvonalként használhatók, és részt vehetnek olyan folyamatokban, mint a sejtnövekedés, sejtproliferáció, sejtdifferenciálódás, sejtmigráció, angiogenezis és tumornövekedés.

Ez a termék egy méretkizárásos kromatográfiás oszlop (SEC), amely alkalmas az exoszómák gyors elválasztására és tisztítására a sejtfelülúszókból. Ez a termék sejtfelülúszót koncentráló szert használ a sejtfelülúszó exoszómák elválasztására és dúsítására, majd extracelluláris vezikula elválasztó kromatográfiás oszlopot használ a koncentrált exoszómák tisztítására. Amely nemcsak megtartja a nagy tisztaságú és nagy aktivitású exoszómákat, hanem hatékonyan eltávolítja a fehérjéket is; Hatékonyan elkerülhető az extracelluláris membrán szerkezetének ultra-nagy centrifugális erő által okozott károsodása az ultra-nagy sebességű centrifugálási módszerrel, és csökkenthető a nagy koncentrációjú fehérjék és egyéb anyagok hatása az exoszómák tisztaságára a hagyományos kicsapási módszerekben.

 

 

Szállítás szobahőmérsékleten; Szobahőmérsékleten tárolandó, 12 hónapig érvényes.

 

 

Alkatrészszám	Összetevő	G4113-5
G4113-1	Kromatográfiás oszlop az exoszómák elválasztására (sejtfelülúszó)	5 darab
G4113-2	Sejtfelülúszó koncentrátum	250 ml
Termék kézikönyv		1 db

 

 

1. A sejtfelülúszó koncentrációja

a) A sejtfelülúszó biológiai mintáit 0,22 μM szűrőmembránnal szűrjük és felhasználásig előzetesen megtisztítjuk;

b) Keverjük össze egyenlő térfogatban a sejtfelülúszó biológiai mintát és a sejtfelülúszó koncentrátumot, rázzuk erősen 15 másodpercig, és hagyjuk állni 2 órán át hűtőszekrényben 4 fokon;

c) Helyezze a keveréket centrifugába 4 fokon 10000 × g-vel 60 percre; Dobja el a felülúszót;

d) A sejtfelülúszó biológiai minta 5 térfogatszázalékos 1 × PBS-pufferét adjuk hozzá a centrifuga-kicsapás teljes újraszuszpendálásához;

e) A nehéz szuszpenzió gazdag exoszómákban, amelyek felhasználhatók a későbbi kísérletekhez, vagy lefagyaszthatók -80 fokon tartalékként.

2. Exoszómák tisztításának előkészítése

a) Készítsen elő egy szobahőmérsékletű steril pufferoldatot, például PBS-t (ajánlott G4202);

b) készítsen elő szobahőmérsékletű steril 0,1 M NaOH reagenst és 20% etanolt;

c) Az elválasztóoszlop használata előtt távolítsa el az elválasztóoszlop piros felső fedelét, és helyezze egy konzolra (ajánlott G6063);

3. Exoszómák szétválasztása

a) Készítsen exoszóma mintákat a sejtfelülúszó koncentrátum koncentrálása és újraszuszpendálása után későbbi felhasználásra;

b) Távolítsa el az elválasztó oszlop fehér alsó fedelét, és miután az oszlopon belüli védőfolyadék kifolyt, adagonként adjon hozzá összesen 30 ml pufferoldatot az elválasztó oszlop tisztításához;

c) Miután a szitalap feletti összes puffer belép az elválasztó oszlopba; Vegyen ki {{0}},5 ml tartalék exoszómamintát a 3.a) lépésből, és adja hozzá a szitalemez közepéhez (ha kevesebb, mint 0,5 ml, adjon hozzá pufferoldatot legfeljebb 0,5 ml);

d) Miután az összes exoszóma minta áthaladt a szitalemezen és bejutott az elválasztó oszlopba, adjon hozzá 2,5 ml pufferoldatot;

e) Miután az előző lépésben az összes pufferoldat áthaladt a szitalemezen és bejutott az elválasztó oszlopba, adjunk hozzá 1 ml pufferoldatot, és ezzel egyidejűleg gyűjtsünk össze 1 ml kimosóoldatot, amely gazdag természetesen aktív exoszómákban; Alkalmazható további kísérletekhez, vagy lefagyasztható -80 fokon biztonsági mentés céljából;

4. Elválasztás utáni kezelés

a) Az exoszómák szétválasztásának befejezése után adjon hozzá összesen 30 ml pufferoldatot tételenként, hogy megtisztítsa az elválasztó oszlopot;

b) Ha folytatni kell az elválasztó oszlop használatát az exoszómák és a sejtfelülúszó elválasztására, ismételje meg a 3.c)–3.e) lépéseket;

c) Ha nem szükséges folytatni az elválasztó oszlop használatát az exoszómák sejtfelülúszótól való elválasztására, először adjon hozzá 5 ml 0,1 M NaOH-t az elválasztóoszlop tisztításához, majd adjon hozzá összesen 20 ml pufferoldatot. adagokban, hogy megtisztítsa és kiegyensúlyozza az elválasztó oszlopot, majd adjon hozzá 5 ml 20%-os etanolt az elválasztó oszlop tisztításához. Tisztítás után fedje le az elválasztó oszlop fehér alsó fedelét; Végül adjon hozzá 2 ml 20%-os etanolt, hogy hidratálja, fedje le és húzza meg az elválasztó oszlop piros tetejét, és tárolja az elválasztó oszlopot szobahőmérsékleten.

 

 

1. Amikor ezzel a termékkel választjuk el az exoszómákat a különböző sejtfelülúszóktól, az elúciós görbe és a tisztaság kissé eltér, de ez nem befolyásolja az általános tendenciát.

2. A sejtfelülúszó exoszómáknak a termékről történő elválasztása során el kell kerülni a folyadékáramlás hosszan tartó megszakítását az elválasztó oszlopban.

3. A termék használata során ne válassza le a különböző forrásokból származó biológiai mintákat ugyanazon az oszlopon, és ne használja újra ugyanazt az oszlopot 5-nél többször.

4. Ez a termék szobahőmérsékleten tárolható és használható, és kerülni kell az alacsony hőmérsékletű használatát és a magas hőmérsékletű melegítést.

5. A kísérlet során a szennyeződés elkerülése és a biztonság érdekében laborruhát és eldobható kesztyűt kell viselni.

 

Csak kutatási célra!